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 “完美新发明”GelBlue——安全凝胶电泳新时代 

  • YF® 594 TUNEL Assay Apoptosis Detection Kit(红色荧光)

    产品货号: T6014

    产品规格: 20T/50T

    目录价(元):1800/3200

    可替代市场同类产品

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产品概述:

产品内

组分 20T 50T
A. TUNEL Equilibration Buffer 2×1 mL 5 mL
B. YF594 TUNEL Reaction Buffer 2×0.5 mL 5×0.5 mL
C. TdT Enzyme 20 μL 50 μL
D. Proteinase K (2 mg/mL) 40 μL 100 μL
E. DNase I (2 U/μL) 5 μL 13 μL
F.       10 × DNase I Buffer 100 μL 260 μL


储存条
本产品应置于-20℃储存; TUNEL Reaction Buffer 避光储存于-20℃,避免反复冻融。本产品在推荐条件下可以储存 12 个月。
注意 : TUNEL Equilibration Buffer 和 TUNEL Reaction Buffer 中含有有毒、致癌成分 Sodium cacodylate trihydrate 和 Cobaltous chloride,使用时请佩戴口罩、手套,接触皮肤 后,请立即有大量水冲洗,废液请按有毒物质处理。

产品介
细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体 DNA 的降解, 这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律,所产生的不同长度的 DNA 片段约为 180 bp-200 bp 的整数倍, 表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异的梯状 Ladder 图谱,本试剂盒采用 TUNEL 法,应用末端脱氧核糖核苷酸转移酶 (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)在凋亡细胞断 裂 DNA 的 3´-OH 末端催化掺入 YF594-dUTP 。 YF594-dUTP 标记的 DNA 可以用荧光显微镜直接观察或者用流式细胞仪定量。TUNEL 法可以选择性的检测凋亡细胞,而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的 DNA 链断裂的细胞。TUNEL 实验中,TdT 酶催化 dUTP 掺入断裂的 DNA 链的 3’-OH 末端。抗原标记的 dUTP(如 digoxin-dUTP、生物素标记的-dUTP,因为它可以直接进行原位检测,是一种更快速、直接的检测手段。

注意事
1. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

说明书:


    UE-T6014

常见问题解答:


为什么出现了一些非特异标记?
1.有些细胞或组织,比如平滑肌,nuclease或polymerase的酶活性水平较高,易导致假阳性,出现非特异性的荧光标记。因此,取出细胞或组织后要立即固定并充分固定,以阻止这些酶的活性; 
2.使用了不恰当的固定液,推荐使用4%多聚甲醛;
3.TUNEL反应时间过长,或者在反应中细胞或组织表面未能一直保持湿润。因此。要注意控制反应时间,并确保反应液能很好地覆盖样品 。
4.石蜡、脂肪、血液、体液等都较易与染料结合,所以组织切片制作时要保持干净、脱蜡要彻底;
5.有些试剂或细胞存在自发荧光,选择染料时要避开自发荧光的颜色。

为什么没有染上荧光?
1.固定不充分。固定液首选4%多聚甲醛,现用现配。不建议使用乙醇,乙醇固定液对组织的渗透力较弱,影响TUNEL标记效率;
2.通透不充分。细胞与冰冻切片,可用0.2% Triton X-100溶液通透5-30min,石蜡切片推荐使用蛋白酶K,37℃通透30 min;不同的细胞和组织所需要的通透时间略有不同,可以适当调整;
3.延长标记时间至2h,并适当增加TdT酶及dUTP的用量;
4.确定实验对象细胞凋亡时有DNA断裂现象发生。

为什么假阳性过高?
1.阴性对照有染色,则说明是非特异性染色;
2.若阴性对照无染色,那么可能是由于固定不充分,组织内有内源性核酸酶的残留,使得DNA全部被切断呈现阳性染色。

如何对细胞核进行复染?
可在TUNEL反应结束后对细胞核进行染色。

为什么荧光背景高?
1.支原体污染:可以使用支原体染色检测试剂盒验证;
2.TUNEL反应过强:可以用试剂盒提供的TdT酶稀释液将TdT酶稀释2-5倍后再按照说明书操作,稀释后的TdT酶仅供当日使用  。

引用及参考文献:


1.OGG1-initiated base excision repair exacerbates oxidative stress-induced parthanatos
Ruoxi Wang, Chunshuang Li, Ping Qiao, Yaoyao Xue, Xu Zheng, Hongyu Chen, Xianlu Zeng,Wenguang Liu, Istvan Boldogh, Xueqing Ba
Cell Death&Disease(2018) DOI: 10.1038/s41419-018-0680-0
应用方向:流式分析

引用文献
1.Apoptosis caused by Hsp90 inhibitor geldanamycin in Leishmania donovani during promastigote-to-amastigote transformation stage
应用方向:细胞凋亡染色&流式分析

2.Notch gain of function in mouse periocular mesenchyme downregulates FoxL2 and impairs eyelid levator muscle formation, leading to congenital blepharophimosis
应用方向:切片染色

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