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 “完美新发明”GelBlue——安全凝胶电泳新时代 

  • YF®555 TUNEL Assay Apoptosis Detection Kit(橙红色荧光)

    产品货号: T6039

    产品规格: 20T/50T

    目录价(元):1800/3200

    可替代市场同类产品

    大包装询价


产品概述:

产品内容

组分

20T

50T

   A. TUNEL Equilibration Buffer

2×1mL

5mL

   B. YF555 TUNEL ReactionBuffer

2×0.5mL

5×0.5mL

   C. TdT Enzyme

20 μL

50 μL

   D. Proteinase K (2 mg/mL)
40 μL
100 μL
   E. DNase I (2 U/μL)
5 μL
13 μL
   F. 10 × DNase I Buffer
100 μL
260 μL

储存条件
本产品应置于-20℃储存; TUNEL Reaction Buffer 避光储存于-20℃,避免反复冻融。本产品在推荐条件下可以储存 12 个月。


产品介绍
细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体 DNA 的降解,这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律,所产生的不同长度的 DNA 片段约为 180 bp-200 bp 的整数倍,表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现特异的梯状 Ladder 图谱,本试剂盒采用 TUNEL 法,应用末端脱氧核糖核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)在凋亡细胞断裂 DNA 的 3´-OH 末 端 催 化 掺 入 YF555-dUTP 。
YF555-dUTP 标记的 DNA 可以用荧光显微镜直接观察或者用流式细胞仪定量。 TUNEL 法可以选择性的检测凋亡细胞, 而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的 DNA链断裂的细胞。TUNEL 实验中, TdT 酶催化 dUTP 掺入断裂的 DNA 链的 3’羟基末端。抗原标记的 dUTP(如digoxin-dUTP、生物素-记的 dUTP,因为它可以直接进行原位检测,是一种更快速、直接的检测手段。


说明书:


    UE-T6039

常见问题解答:


为什么出现了一些非特异标记?
1.有些细胞或组织,比如平滑肌,nuclease或polymerase的酶活性水平较高,易导致假阳性,出现非特异性的荧光标记。因此,取出细胞或组织后要立即固定并充分固定,以阻止这些酶的活性; 
2.使用了不恰当的固定液,推荐使用4%多聚甲醛;
3.TUNEL反应时间过长,或者在反应中细胞或组织表面未能一直保持湿润。因此。要注意控制反应时间,并确保反应液能很好地覆盖样品 。
4.石蜡、脂肪、血液、体液等都较易与染料结合,所以组织切片制作时要保持干净、脱蜡要彻底;
5.有些试剂或细胞存在自发荧光,选择染料时要避开自发荧光的颜色。

为什么没有染上荧光?
1.固定不充分。固定液首选4%多聚甲醛,现用现配。不建议使用乙醇,乙醇固定液对组织的渗透力较弱,影响TUNEL标记效率;
2.通透不充分。细胞与冰冻切片,可用0.2% Triton X-100溶液通透5-30min,石蜡切片推荐使用蛋白酶K,37℃通透30 min;不同的细胞和组织所需要的通透时间略有不同,可以适当调整;
3.延长标记时间至2h,并适当增加TdT酶及dUTP的用量;
4.确定实验对象细胞凋亡时有DNA断裂现象发生。

为什么假阳性过高?
1.阴性对照有染色,则说明是非特异性染色;
2.若阴性对照无染色,那么可能是由于固定不充分,组织内有内源性核酸酶的残留,使得DNA全部被切断呈现阳性染色。

如何对细胞核进行复染?
可在TUNEL反应结束后对细胞核进行染色。

为什么荧光背景高?
1.支原体污染:可以使用支原体染色检测试剂盒验证;
2.TUNEL反应过强:可以用试剂盒提供的TdT酶稀释液将TdT酶稀释2-5倍后再按照说明书操作,稀释后的TdT酶仅供当日使用  。
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