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  买染料送蓝光切胶仪开启安全凝胶电泳新时代          【新品】低丰度蛋白检测神器-TSA免疫荧光技术

  • YF®594 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits(红色荧光)

    产品货号: C6021

    产品规格: 20T/50T

    目录价(元):1800/4000

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产品概述:

产品内容

组分

20 T

50 T

保存温度

稳定性

  组分A  10mM EdU

0.4 mL

1 mL

-20

按制定温度保存可有效放置一年

  组分B  YF®488/555/594/647A Azide

100 µL

250 µL

-20,避光

  组分C  CuSO4

0.8 mL

2mL

2-8

  组分D  Click-iT EdU缓冲液添加物

60 mg

150 mg

2-8

规格:上述反应次数是针对6孔板培养的细胞。(不同容器细胞成像的具体用量可参考附表1.EdU培养基及染色反应液的使用量参考
荧光光谱数据:
YF®488 Azide:495/519 nm;
YF®555 Azide:555/565 nm;
YF®594 Azide:594/617 nm;

YF®647A Azide:650/670 nm.
其他所需试剂:
10 mM PBS, pH7.2-7.6中性多聚甲醛固定液(4%多聚甲醛in PBS )促渗试剂(0.5% Triton X-100 in PBS)1% BSA in PBS, pH7.4去离子水


储存条件

-20℃避光保存,可保存 12 个月。开封后,保存温度详见说明书。

产品介绍

细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。最精确的检测细胞增殖方法是 BrdU法。EdU 法检测试剂盒是 Brdu 方法的革命性突破。EdU(5-溴-2-脱氧尿嘧啶)试剂盒是一种嘧啶类似物,可以在 DNA 合成期整合入 DNA 双链。EdU 法检测是基于“点击”反应,一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃的原子共价反应。
本试剂盒中,EdU 试剂含有炔烃,而 YF ®594 Azide 染料试剂含有叠氮化合物。点击法的 EdU 标记增殖快速有效,易于使用。只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的 EdU。标准化的戊二醛固定和去污剂促渗可以使检测试剂进入细胞,而 brdu 方法则需要 DNA 变性(如酸变性、热变性或者用 DNase 消化)去暴露 BrdU,从而方便 BrdU抗体结合。
本试剂盒包含 EdU 法检测所需要的所有组份,可以检测细胞增殖与细胞周期分析。对于细胞周期的分析,试剂盒可以提供蓝色细胞核Hoechst33342。

实验图


说明书:


    UE-C6021

常见问题解答:


YF®488/555/594/647有什么区别?
主要就是检测EDU的物质带的荧光基团不同,检测时发射荧光的颜色不同。实验效果相同,可根据偏好或需求进行选择。

可以用于检测植物细胞核内的DNA复制吗? 
可以。EdU是小分子,可以穿透植物细胞的细胞壁。

质粒转染表达的荧光蛋白检测与Click反应兼容吗?检测顺序是什么?
可以兼容。但本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光,所以要先检测这类荧光蛋白,再进行Click反应。

观测到较高的本底干扰,这是什么原因所致?如何减少本底干扰?
叠氮化物和炔烃类间Click反应非常有选择性,生物体内几乎不可能有副反应发生,所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。同时,也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click反应对照,以排除自发荧光干扰。此外,您还可在无EdU 体系中进行完整的Click反应,验证Click反应信号的特异性。

为什么标记样品无信号或特异性信号非常低?如何提高信号? 
1.请保证试剂使用时为无色的状态,不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液;
2.为确保Click反应试剂能够到达核内,细胞需要充分地固定和通透;
3.由于铜离子能结合到部分试剂上,这会导致催化Click反应的有效浓度降低。所以在Click反应前,不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂(例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等),对某些含有这些物质的实验样品来说,进行Click反应前,可能需要增加额外的洗涤步骤;
4.当铜离子在合适的化合价时,Click反应才有效。Click反应中用到的铜离子为二价铜(Cu2+)。 
5.延长Click反应的时间至超过30分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click反应试剂再次进行30分钟的孵育,可更有效地提高标记效率。 

能否在活细胞中进行Click-iT EdU检测?
不可以。虽然EdU是对活细胞进行代谢标记,但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型,检测信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。

如何对细胞核进行复染?
试剂盒中配有Hoechst 33342,可以在Click反应后用于细胞核的染色。也可选择使用DAPI,但是Hoechst 33342对于活细胞的穿透力要比DAPI强。
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