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  买染料送蓝光切胶仪开启安全凝胶电泳新时代          【新品】低丰度蛋白检测神器-TSA免疫荧光技术

  • EdU

    产品货号: E6032

    产品规格: 2mg/10mg/50mg

    目录价(元):1000/2300/3800

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产品概述:

产品参数
分子量:252.23,可溶于水,PBS 或生理盐水
纯度:≧98%
储存条件:-20℃储存,可保存一年

产品介绍

EdU, 即 5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的 DNA 分子中, 通过基于 EdU 与 YF 系列荧光标记染料的特异性反应快 速检测细胞 DNA 复制活性, 可以快速准确检测细胞增殖能力。 

本产品系列适用于小鼠,大鼠及其他动物模型的各种组织器官(血管除外)的 EdU 细胞增殖检测。 

与 BrdU 检测方法相比,EdU 检测方法用量小得多,十分之一的用量即可获得与 BrdU 检测试剂盒相同甚至更好的检测结果,而且小分子化学反应检测方法反应快,效率高,反应时间仅需几分钟,不需要 DNA 变性、蛋白酶处理、抗原抗体过夜孵育,能够更好地保护细胞形态,更简单、更灵敏、更快速、更准确。


实验前须知
EdU 建议初始给药量为 5mg/kg,稀释浓度为 0.5~1 mg/mL。 
注:1)可采用 PBS 或生理盐水稀释; 2)注射时可将 EdU 注射液进一步稀释,不会影响 EdU 的稳定性。


注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


说明书:


   UE-E6032

常见问题解答:


YF®488/555/594/647有什么区别?
主要就是检测EDU的物质带的荧光基团不同,检测时发射荧光的颜色不同。实验效果相同,可根据偏好或需求进行选择。

可以用于检测植物细胞核内的DNA复制吗? 
可以。EdU是小分子,可以穿透植物细胞的细胞壁。

质粒转染表达的荧光蛋白检测与Click反应兼容吗?检测顺序是什么?
可以兼容。但本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光,所以要先检测这类荧光蛋白,再进行Click反应。

观测到较高的本底干扰,这是什么原因所致?如何减少本底干扰?
叠氮化物和炔烃类间Click反应非常有选择性,生物体内几乎不可能有副反应发生,所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。同时,也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click反应对照,以排除自发荧光干扰。此外,您还可在无EdU 体系中进行完整的Click反应,验证Click反应信号的特异性。

为什么标记样品无信号或特异性信号非常低?如何提高信号? 
1.请保证试剂使用时为无色的状态,不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液;
2.为确保Click反应试剂能够到达核内,细胞需要充分地固定和通透;
3.由于铜离子能结合到部分试剂上,这会导致催化Click反应的有效浓度降低。所以在Click反应前,不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂(例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等),对某些含有这些物质的实验样品来说,进行Click反应前,可能需要增加额外的洗涤步骤;
4.当铜离子在合适的化合价时,Click反应才有效。Click反应中用到的铜离子为二价铜(Cu2+)。 
5.延长Click反应的时间至超过30分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click反应试剂再次进行30分钟的孵育,可更有效地提高标记效率。 

能否在活细胞中进行Click-iT EdU检测?
不可以。虽然EdU是对活细胞进行代谢标记,但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型,检测信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。

如何对细胞核进行复染?
试剂盒中配有Hoechst 33342,可以在Click反应后用于细胞核的染色。也可选择使用DAPI,但是Hoechst 33342对于活细胞的穿透力要比DAPI强。

引用及参考文献:


引用文献
1.Topoisomerase II β Deficiency Enhances Camptothecin-induced Apoptosis
应用方向:Click-iT反应
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