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细胞检测新品:NO、ROS、CFDA SE增殖与示踪          “完美新发明”GelBlue——安全凝胶电泳新时代         【新品】低丰度蛋白检测神器-TSA免疫荧光技术

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[新品]可染7色彩虹的低丰度蛋白检测神器-TSA免疫荧光技术

发布时间:2020/4/30 点击次数:1318 来源:US Everbright Inc.

一、免疫荧光技术

免疫荧光(Immunofluorescence, IF)技术是根据抗原抗体反应的原理,将已知抗体制成荧光抗体,荧光抗体作为探针检测组织或细胞内相应抗原。用荧光显微镜观察在组织或细胞内形成含标记荧光素的抗原抗体复合物来确定抗原的性质、定位及用定量技术测定含量。

Opal/TSA多标免疫荧光技术较传统技术(一抗直标、二抗间接标记和链霉亲和素-生物素等)有信号放大倍数高、操作简单、多重标记不受限制且成本低等优势。

 

Opal/TSA多标染色技术

传统免疫荧光

适用范围

ICCIHC和原位杂交(FISH)应用中的中低丰度靶标

ICCIHC和原位杂交(FISH)应用中的高中丰度靶标

靶点数目

不受限制(最多可同时染色8种)

一般标记3

抗体种类

同种属的不同一抗即可,连接辣根过氧化物酶的同种属二抗

不同种属的不同一抗,连接荧光探针的不同种属二抗

染色策略

任何样本无需任何染色策略,简单的重复前一步的染色过程,样本/靶点的差异不影响染色过程,操作简单

样本抗原的空间位置的差异,需要设计复杂的染色策略。样本/靶点的差异导致染色策略的差异,染色过程复杂、多变

染色效果

高染色分辨率和染色特异性,信号强度强无背景影响,各靶点的信噪比大大提高,适合组织基于单细胞的定量分析

信号强度较弱,各种抗体间存在互相影响,背景较高,对基于单细胞的定量分析不利

应用范围

二抗具备通用性,所有的研究领域均可使用

二抗不具备通用性,应用领域受到局限


二、 TSA原理

酪酰胺信号放大(TSA)是一种基于辣根过氧化酶(HRP)的催化活性对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。原理为酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(已标记荧光的酪胺在HRP催化H2O2下形成共价键结合位点)产生的大量酶促产物与目标蛋白的酪氨酸残基共价结合,从而使目标蛋白标记上特异的荧光或生物素。

三、 TSA产品特点

3.1 适用广多色标记。细胞和组织都可染色,且标记靶点数量不受限制,目前最多可8色标记(含DAPI)。

 

参考文献:Spatial computation of intratumoral T cells correlates with survival of patients with pancreatic cancer 

Nature Communications volume 8, Article number: 15095 (2017)  

DOI: 10.1038/ncomms15095

3.2 多重标记可避免抗体种属交叉问题。对前一轮非共价结合的抗体进行微波处理并进行清洗,共价结合的荧光素留存在样品上,周而复始进行多重标记。

3.3 染色特异性好,信号强度高,适合低丰度靶标。据数据显示荧光亮度比传统免疫染色100,且节省抗体(一抗可1:200-1:3000稀释)

3.4 石蜡切片样本荧光染色背景干净。解决了传统组化及荧光染色石蜡切片背景高的问题。


四、 TSA实验步骤(组织切片为例)











注意事项:

1)冷冻切片30μM厚度为佳;2)避免切片干燥导致背景高;3)H2O2孵育时间不宜过长一般在5-10min;4)选择特异性好的一抗。


五、 TAS实验图

5.1 TSA&荧光二抗AF488-IgGHela细胞)


结果显示:用常规免疫方法检测到信号很弱,用TSA可得到很明亮的信号(信号放大作用)


5.2 YF-Tyramide石蜡切片染色


结果显示:UE YF-Tyramide染色石蜡切片效果良好,且无非特异性染色,染色背景干净



5.3 YF-Tyramide细胞染色(Hela细胞


结果显示:UE biotin-Tyramide、YF488-Tyramide和YF594-Tyramide染色细胞效果良好,且无非特异性染色。


六、UE TSA产品目录

产品类别

货号-规格

产品名称

目录价(RMB

荧光/生物素标记酪酰胺试剂盒

Y6081-50 slides

YF®350 Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG

1490

Y6081-200 slides

4200

Y6082-50 slides

YF®350 Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG

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Y6082-200 slides

4200

Y6083-50 slides

YF®350 Tyramide Kit, HRP Streptavidin

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4200

Y6084-50 slides

YF®488 Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG

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Y6084-200slides

4200

Y6085-50 slides

YF®488 Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG

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Y6085-200 slides

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Y6086-50 slides

YF®488 Tyramide Kit, HRP Streptavidin

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Y6087-50 slides

YF®555 Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG

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Y6087-200 slides

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Y6088-50 slides

YF®555 Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG

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4200

Y6089-50 slides

YF®555 Tyramide Kit, HRP Streptavidin

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Y6090-50 slides

YF®594 Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG

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Y6091-50 slides

YF®594 Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG

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Y6092-50 slides

YF®594 Tyramide Kit, HRP Streptavidin

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Y6093-50 slides

YF®640 Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG

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Y6093-200 slides

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Y6094-50 slides

YF®640 Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG

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Y6094-200 slides

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Y6095-50 slides

YF®640 Tyramide Kit, HRP Streptavidin

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Y6095-200 slides

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Y6096-50 slides

YF®680 Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG

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Y6096-200 slides

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Y6097-50 slides

YF®680 Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG

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Y6098-50 slides

YF®680 Tyramide Kit, HRP Streptavidin

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Y6098-200 slides

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Biotin Tyramide Kit, HRP Goat anti-mouse IgG

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Biotin Tyramide Kit, HRP Goat anti-rabbit IgG

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B6101-50 slides

Biotin Tyramide Kit, HRP Streptavidin

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B6101-200 slides

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Tyramide

YT0069-100μL

YF®350 Tyramide200×

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YT0070-100μL

YF®488 Tyramide200×

3063

YT0071-100μL

YF®555 Tyramide200×

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YT0072-100μL

YF®594 Tyramide200×

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YT0073-100μL

YF®640 Tyramide200×

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YT0074-100μL

YF®680 Tyramide200×

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BT0075-100μL

Biotin Tyramide200×

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